立时撕下伪装，在由音忍四人众所维持的结界里，跟第三代火影挑战。
在激战中，三代火影使用“忍术·瓦片手里剑”攻击大蛇丸，但轻易被大蛇丸躲过，大蛇丸立即反击、以“潜影蛇手”袭击三代火影；之后三代火影使用“土遁·土流大河”、“土遁·土龙弹”及“火遁·火龙弹”连续攻击大蛇丸，但被大蛇丸使用土替身躲过。
召唤初代二代 之后，三代火影使用“手里剑影分身之术”之时，大蛇丸使用秽土转生将初代火影与二代火影召唤出来，他们的意志被完全抹杀，被迫参加战斗，二人无法发挥原本的实力。
在战斗过程中，日斩使用“火遁·火龙炎弹”从口中吐出火焰向兄弟二人扑面而来，面对火遁的攻势，第二代火影使用水遁·水阵壁从口中猛烈喷出如海浪一般的水之墙，抵挡住日斩的火遁攻击。
紧接着，第二代火影双手合十后，使用水遁·水冲波在一瞬间凭空召唤出犹如龙卷风般快速旋转上升的水，之后水犹如瀑布一般扩散并向下冲击日斩，日斩则使用土遁·土流壁筑成巨岩阻挡洪水；但就在从岩石返归城楼之际，初代火影使用木遁秘术·树界降诞从地上快速生长出多棵树木，树木连根拔起，在一瞬间制造出一片森林，并且树枝牢牢的捆绑住日斩的双手与双脚。